果膠裂解酶測(cè)試盒

微量法100T/48S

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

果膠裂解酶（EC4.2.2.10）是果膠酶的重要組成部分，是一種能降解植物細(xì)胞壁，導(dǎo)致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶，來(lái)源比較廣泛，主要來(lái)源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的純化，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理

果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體6mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存。

酶液提取

1．組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2．細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 培養(yǎng)液：直接測(cè)定。

測(cè)定操作表

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至235nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 操作表

酶活性計(jì)算公式

1. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 組織中PL活性

（1）按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 64.1×△A÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 64.1×△A÷W

2. 細(xì)菌、真菌PL活性

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/104cell）= △A ÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T 

 = 64.1×△A÷細(xì)胞數(shù)量

3. 培養(yǎng)液PL活性

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/mL）= △A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T

= 64.1×△A

ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min

2. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 組織中PL活性

（1）按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 128.2×△A÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 128.2×△A÷W

2. 細(xì)菌、真菌PL活性

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/104cell）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T 

    = 128.2×△A÷細(xì)胞數(shù)量

3. 培養(yǎng)液PL活性

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min//mL）= △A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T

= 128.2×△A

ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國(guó)外試劑的訂購(gòu)。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國(guó)際與國(guó)內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

果膠裂解酶測(cè)試盒